EntréeMéthodes de stérilisation des produits en caoutchouc et en métal. Stérilisation : concepts, méthodes, modes
MINISTÈRE DE LA SANTÉ DE LA FÉDÉRATION DE RUSSIE
ARTICLE PHARMACOPÉIEN GÉNÉRAL
StérilisationOFS.1.1.0016.15
Au lieu de l'art. Petite amieXI, numéro 2
Cette monographie générale de la pharmacopée établit les méthodes et conditions de stérilisation utilisées pour la préparation des médicaments stériles.
La stérilité signifie l'absence de micro-organismes viables et de leurs spores.
La stérilisation est un processus validé utilisé dans la préparation de formes posologiques stériles pour libérer le produit, l'équipement, les excipients et l'emballage des micro-organismes vivants et de leurs spores.
Si les conditions de stérilisation changent, y compris des changements dans le volume de charge du stérilisateur, il est nécessaire de revalider.
Les méthodes décrites ci-dessous sont applicables pour inactiver les bactéries, les levures et les moisissures.
Dans la mesure du possible, les produits sont stérilisés dans leur emballage final (stérilisation terminale).
Dans les cas où la stérilisation finale n'est pas possible, utiliser la méthode de filtration sur membrane ou obtenir médicaments dans des conditions aseptiques sans stérilisation ultérieure produit final. De plus, il est possible d'effectuer un traitement de l'objet (par exemple, une stérilisation aux rayons gamma) dans l'emballage final. Dans tous les cas, le conditionnement et les fermetures doivent garantir la stérilité du médicament pendant toute sa durée de conservation.
NIVEAU DE STÉRILITÉ
Pour les méthodes décrites ci-dessous, indiquer si nécessaire le niveau d’assurance de stérilité (SLA).
Le niveau d'assurance de stérilité d'un processus de stérilisation est le degré d'assurance avec lequel le processus garantit la stérilité de toutes les unités d'un lot. Pour un procédé donné, le niveau d'assurance de stérilité est défini comme la probabilité d'avoir une unité non stérile dans un lot. Par exemple, UOS = 10 −6 signifie que dans un lot stérilisé de 10 6 unités de produit fini, il y a une probabilité qu'il n'y ait pas plus d'un micro-organisme viable. Le niveau d'assurance de stérilité du processus de stérilisation pour un produit spécifique est établi lors du processus de validation.
MÉTHODES ET CONDITIONS DE STÉRILISATION
La stérilisation peut être effectuée par l'une des méthodes suivantes ou une combinaison de celles-ci.
- Méthodes thermiques :
- vapeur saturée sous pression (autoclavage) ;
- air chaud (stérilisation de l'air).
- Méthodes chimiques :
- des gaz;
- solutions antiseptiques.
- Stérilisation par filtration (à travers des filtres ayant la taille de pores requise).
- Méthode de stérilisation par rayonnement.
L'utilisation d'une modification ou d'une combinaison de ces méthodes est autorisée à condition que le processus de stérilisation sélectionné soit validé pour garantir à la fois l'efficacité du processus et l'intégrité du produit, de l'emballage et des fermetures.
Pour toutes les méthodes de stérilisation, y compris celles utilisant des conditions standard, les étapes critiques de la production sont surveillées tout au long du processus de stérilisation afin de garantir que les conditions de stérilisation requises sont remplies pour l'ensemble du lot de produits.
Stérilisation thermique
Stérilisation à la vapeur saturée sous pression (autoclavage)
La stérilisation à la vapeur saturée est réalisée à une température
120 – 122°C sous une pression de 120 kPa et à une température de 130 – 132°C sous une pression de 200 kPa. Cette méthode est le plus souvent utilisée pour les solutions aqueuses et autres formes posologiques liquides dans des flacons, ampoules ou autres types d’emballages hermétiquement fermés et préstérilisés. La stérilisation est effectuée dans des stérilisateurs à vapeur (autoclaves). Les conditions standard sont un chauffage à une température de 120 à 122 °C pendant 8 à 15 minutes. Le temps de stérilisation dépend de proprietes physiques et chimiques et le volume du produit, ainsi que le matériel utilisé (tableau 1).
Tableau 1 - Temps de stérilisation pour différents volumes de solution
Les graisses et les huiles sont stérilisées à une température de 120 à 122 °C pendant 2 heures.
Les produits en verre, porcelaine, métal, pansements et matériaux auxiliaires et, si nécessaire, vêtements hygiéniques, sont stérilisés à une température de 120 - 122°C - pendant 45 minutes, à
130 – 132 °C – pendant 20 minutes. Pour stériliser les produits en caoutchouc, utilisez le premier de ces modes.
D'autres combinaisons de durée et de température sont autorisées s'il a été préalablement prouvé que le régime de stérilisation sélectionné fournit le niveau requis et reproductible de mort des micro-organismes. Les procédures utilisées doivent garantir un niveau d'assurance de stérilité ne dépassant pas 10 -6.
L'autoclave est chargé de manière à garantir une température uniforme tout au long de la charge. Pendant le processus d'autoclavage, les conditions du processus de stérilisation (température, pression et durée) doivent être enregistrées. La température est généralement mesurée à l'aide d'éléments thermosensibles placés dans des emballages de contrôle, ainsi que de thermoéléments supplémentaires placés dans les zones à température la plus basse de la chambre de stérilisation, qui sont installés à l'avance. Les conditions de chaque cycle de stérilisation sont enregistrées, par exemple, sous la forme d'un diagramme température-temps ou d'une autre méthode appropriée.
Pour évaluer l'efficacité de chaque cycle de stérilisation, il est possible d'utiliser à la fois des indicateurs chimiques (thermiques) et biologiques.
Stérilisation à l'air chaud (stérilisation de l'air)
Pour cette méthode de stérilisation thermique, les conditions standards sont un chauffage à une température d'au moins 160°C pendant au moins
2 heures
Pour la stérilisation de substances pulvérulentes résistantes à la chaleur (chlorure de sodium, oxyde de zinc, talc, argile blanche, etc.) ou minérales et les huiles végétales, graisses, lanoline, vaseline, cire, etc. la température et le temps de stérilisation sont fixés en fonction du poids de l'échantillon (Tableaux 2 et 3).
Tableau 2 - Conditions de stérilisation des substances en poudre résistantes à la chaleur
Tableau 3 - Conditions de stérilisation des huiles minérales et végétales, graisses, lanoline, vaseline, cire, etc.
Les produits en verre, métal, porcelaine, les installations de filtration stérilisante avec filtres et récepteurs de filtrat sont stérilisés à une température de 180 °C pendant 60 minutes ou à une température de 160 °C pendant 2,5 heures.
La stérilisation à l'air à des températures supérieures à 220 °C est généralement utilisée pour stériliser et dépyrogéner les emballages en verre. Dans ce cas, une réduction de 3 ordres de grandeur de la quantité d'endotoxines thermostables doit être démontrée au lieu d'utiliser des indicateurs biologiques.
Des combinaisons de durée et de température peuvent être utilisées s’il a été prouvé au préalable que le régime de stérilisation sélectionné fournit le niveau requis et reproductible de mort des micro-organismes. Les procédures utilisées doivent garantir un niveau d'assurance de stérilité ne dépassant pas 10 -6.
La stérilisation de l'air est effectuée dans une armoire spéciale à chaleur sèche avec circulation forcée d'air stérile ou sur d'autres équipements spécialement conçus à cet effet. L'armoire de stérilisation est chargée de manière à garantir une température uniforme tout au long de la charge. La température dans l'armoire de stérilisation est généralement mesurée à l'aide d'éléments sensibles à la température placés dans des emballages de contrôle, ainsi que de thermoéléments supplémentaires placés dans les zones à température la plus basse de l'armoire de stérilisation, qui sont installés à l'avance. La température et la durée sont enregistrées lors de chaque cycle de stérilisation. Pour évaluer l'efficacité de chaque cycle de stérilisation, il est possible d'utiliser à la fois des indicateurs chimiques (thermiques) et biologiques.
Stérilisation chimique
La stérilisation chimique est réalisée avec des gaz ou des solutions.
Stérilisation au gaz
La stérilisation au gaz n'est utilisée que si d'autres méthodes ne peuvent pas être utilisées. Avec cette méthode de stérilisation, la pénétration du gaz et de l'humidité dans le produit stérilisé doit être assurée, ainsi que le dégazage ultérieur et l'élimination de ses produits de décomposition dans le produit stérilisé à un niveau qui ne provoque pas d'effet toxique lors de l'utilisation du médicament.
La stérilisation au gaz s'effectue dans des stérilisateurs à gaz ou des microanaérostats (appareils portables) équipés d'un système d'alimentation en gaz et d'un dégazage post-stérilisation. L'oxyde d'éthylène est généralement utilisé comme gaz. En raison de son risque d'incendie élevé, il peut être mélangé avec n'importe quel gaz inerte.
La stérilisation au gaz s'effectue dans les modes suivants :
- – oxyde d'éthylène : dose stérilisante 1200 mg/dm 3, température au moins
18 °C, humidité relative 80 %, temps de maintien – 16 heures (appareil portable) ; - – mélange d'oxyde d'éthylène et de bromure de méthyle (1:2,5) :
a) dose stérilisante 2000 mg/dm3, température 55 °C, humidité relative 80 %, temps de maintien 4 heures ;
b) dose stérilisante 2000 mg/dm3, température d'au moins 18 °C, humidité relative 80 %, temps de maintien 16 heures.
Il est permis d'utiliser d'autres modes de stérilisation au gaz validés qui garantissent la stérilité et la sécurité de l'objet.
L'oxyde d'éthylène peut être mutagène et toxique, en particulier lorsqu'il est utilisé avec des matériaux contenant des ions chlore. En raison de la toxicité de l'oxyde d'éthylène et du bromure de méthyle, l'utilisation de produits stérilisés par ces gaz n'est autorisée qu'après avoir été dégazés, c'est-à-dire conservés dans une pièce ventilée aux quantités résiduelles admissibles spécifiées dans la documentation réglementaire.
Les conditions de dégazage dépendent de la destination, du mode d'application, de la taille du produit, du matériau du produit et de l'emballage et sont indiquées dans la documentation réglementaire et technique du produit.
Dans la mesure du possible, les paramètres suivants sont enregistrés pendant le processus de stérilisation : concentration de gaz, humidité relative, température et durée de stérilisation. Les mesures sont effectuées dans les zones où les conditions de stérilisation sont pires que celles établies lors du processus de validation.
Les produits à stériliser sont conditionnés dans des sachets en film de polyéthylèneépaisseur de 0,06 à 0,20 mm, parchemin, etc. La méthode est recommandée pour les produits en caoutchouc, en matériaux polymères, en verre et en métal.
L'efficacité du processus de stérilisation au gaz est vérifiée à chaque chargement à l'aide d'indicateurs biologiques.
Avant la sortie de chaque lot, la stérilité est vérifiée sur un certain nombre d'échantillons.
Stérilisation chimique avec solutions
La stérilisation chimique est réalisée avec des solutions antiseptiques (peroxyde d'hydrogène et peracides). L'efficacité de la stérilisation avec des solutions antiseptiques dépend de la concentration de la substance active, de la durée de stérilisation et de la température de la solution stérilisante.
Lors de la stérilisation avec une solution de peroxyde d'hydrogène à 6 %, la température de la solution stérilisante doit être d'au moins 18 °C, la durée de stérilisation est de 6 heures ; à une température de 50 °C – 3 heures.
Lors de la stérilisation avec une solution à 1 % de dézoxon-1 (acide peracétique), la température de la solution stérilisante doit être d'au moins 18 °C, la durée de stérilisation est de 45 minutes.
La stérilisation chimique avec des solutions antiseptiques est réalisée dans des récipients fermés en verre, en plastique ou recouverts d'émail intact, le produit étant complètement immergé dans la solution pendant toute la durée de la stérilisation. Le produit est ensuite lavé à l'eau stérile dans des conditions aseptiques.
La méthode de stérilisation avec des solutions antiseptiques est utilisée pour les produits en matériaux polymères, caoutchouc, verre et métaux résistants à la corrosion.
Stérilisation par filtration
Certains ingrédients actifs et médicaments qui ne peuvent être stérilisés de manière terminale par aucune des méthodes décrites ci-dessus peuvent être stérilisés à l’aide de filtres à membrane. Ces produits nécessitent des précautions particulières. Le processus de production et l'environnement de travail doivent présenter un risque minimal de contamination microbienne et nécessiter une surveillance régulière. L'équipement, l'emballage, les fermetures et, si possible, les ingrédients doivent être convenablement stérilisés. Il est recommandé d'effectuer une filtration immédiatement avant de remplir l'emballage. Les opérations suivant la filtration sont réalisées dans des conditions aseptiques.
La préfiltration est effectuée à travers des filtres à membrane dont la taille des pores ne dépasse pas 0,45 microns. Ensuite, les solutions sont passées à travers des filtres à membrane dont la taille nominale des pores ne dépasse pas 0,22 microns, capables de retenir au moins 10 7 micro-organismes. Pseudomonas diminuta par centimètre carré de surface. Il est possible d'utiliser d'autres types de filtres offrant la même efficacité de filtration.
L'adéquation des filtres à membrane est établie par des tests microbiologiques utilisant des micro-organismes appropriés, par ex. Pseudomonas diminuta(ATCC 19146, NCIMB 11091 ou CIP 103020). Il est recommandé d'utiliser au moins 10 7 CFU/cm 2 de surface active du filtre. Une suspension de micro-organismes doit être préparée dans un bouillon tryptone-soja qui, après passage sur filtre, est collecté de manière aseptique et incubé en conditions aérobies à une température ne dépassant pas 32°C.
Le niveau de filtration est déterminé comme la valeur du logarithme de la réduction (LDR) de la contamination microbienne. Par exemple, si 107 micro-organismes sont retenus lors de la filtration sur une membrane filtrante ayant une taille de pores de 0,22 microns, le VLS est d'au moins 7.
Il est nécessaire de prendre en compte le niveau de contamination microbienne avant filtration, la capacité du filtre, le volume du lot de produit, la durée de filtration, et également d'éviter la contamination du produit par les micro-organismes du filtre. La durée d'utilisation du filtre ne doit pas dépasser la durée établie lors de la validation de ce filtre en association avec le produit filtré spécifique. Les filtres à membrane ne doivent pas être réutilisés.
L'intégrité du filtre à membrane prêt à l'emploi est vérifiée avant et après filtration par des tests appropriés au type de filtre et à l'étape de test, tels que le test de diffusion en flux de saturation (« point de bulle ») ou le test de trempage sous pression.
Étant donné que la stérilisation par filtration comporte un risque potentiel plus élevé que les autres méthodes de stérilisation, la préfiltration à travers des filtres à membrane est recommandée lorsque de faibles niveaux de contamination microbienne ne peuvent être obtenus par d'autres moyens.
Obtention de médicaments dans des conditions aseptiquessans stérilisation ultérieure du produit final
L'obtention de médicaments dans des conditions aseptiques sans stérilisation ultérieure du produit final a pour but de maintenir la stérilité du médicament à l'aide de composants dont chacun a été préalablement stérilisé par l'une des méthodes décrites ci-dessus. Ceci est réalisé en effectuant le processus dans des locaux d'une certaine classe de propreté, ainsi qu'en utilisant des conditions et des équipements garantissant la stérilité.
Les opérations suivantes peuvent être réalisées dans des conditions aseptiques : le processus de remplissage de l'emballage, le bouchage, le mélange aseptique des ingrédients suivi du remplissage et du bouchage aseptiques. Maintenir la stérilité des ingrédients et du produit fini pendant processus de production une attention particulière doit être portée à :
- – l'état de l'environnement de production ;
- - personnel;
- – les surfaces critiques ;
- – stérilisation des emballages et des fermetures et procédures de transfert ;
- – la durée maximale de stockage autorisée du produit jusqu'au remplissage de l'emballage final.
La validation du processus implique une vérification appropriée de tout ce qui précède, ainsi qu'une surveillance systématique à l'aide de tests simulés utilisant des milieux de culture incubés et testés pour la contamination microbienne (tests de chargement des milieux). Les tests de stérilité doivent être effectués sur un nombre approprié d’échantillons avant la libération de chaque lot de produit stérilisé par filtre et/ou fabriqué de manière aseptique.
Méthode de stérilisation par rayonnement
La méthode de stérilisation par rayonnement est réalisée en irradiant le produit rayonnement ionisant. Cette méthode peut être utilisée pour la stérilisation de matières végétales médicinales, médicinales préparations à base de plantes, plantes médicinales, etc.
Rayonnement γ, dont la source peut être soit un élément radio-isotopique (par exemple, le cobalt 60), soit un faisceau d'électrons fourni par un accélérateur d'électrons approprié.
Pour cette méthode de stérilisation, la dose d'absorption est fixée à partir de
10 à 50 kGy. L'utilisation d'autres doses est autorisée s'il a été préalablement prouvé que le régime choisi fournit le niveau de létalité nécessaire et reproductible des micro-organismes. Les procédures et précautions utilisées doivent garantir un niveau d’assurance de stérilité ne dépassant pas 10 -6.
L’avantage de la stérilisation par rayonnement réside dans sa faible réactivité chimique et dans sa dose de rayonnement facilement contrôlée et mesurable avec précision. La stérilisation par rayonnement s'effectue à une température minimale, mais il peut y avoir des limites lors de l'utilisation de certains types d'emballages en verre et en plastique.
Pendant le processus de stérilisation par rayonnement, le rayonnement absorbé par le produit fini doit être surveillé en permanence à l'aide de méthodes dosimétriques établies, quelle que soit la dose. Les dosimètres sont étalonnés par rapport à une source étalon dans une installation de rayonnement de référence dès réception du fournisseur et par la suite à des intervalles ne dépassant pas un an.
Si une évaluation biologique est fournie, elle est réalisée à l'aide d'indicateurs biologiques.
INDICATEURS BIOLOGIQUES DE STÉRILISATION
Les indicateurs biologiques sont des préparations standardisées de micro-organismes spécifiques utilisées pour évaluer l'efficacité du processus de stérilisation.
L'indicateur biologique est généralement constitué de spores bactériennes appliquées sur un support inerte, tel qu'une bande de papier filtre, une plaque de verre ou un tube en plastique. Le support inoculé est isolé de manière à éviter son endommagement ou sa contamination et, en même temps, à assurer le contact de l'agent stérilisant avec les micro-organismes. Les suspensions de spores peuvent être conservées dans des ampoules hermétiquement fermées.
Les indicateurs biologiques sont préparés de manière à assurer leur conservation dans certaines conditions ; Ils doivent avoir une date de péremption.
Les mêmes souches de bactéries utilisées dans la production d'indicateurs biologiques peuvent être inoculées directement dans le produit liquide à stériliser, ou dans un produit liquide similaire à celui à stériliser. Dans ce cas, il faut prouver que le produit liquide n’a pas d’effet inhibiteur sur les spores, notamment sur leur germination.
Pour un indicateur biologique, les caractéristiques suivantes sont indiquées : le type de bactérie utilisée comme micro-organisme de référence ; numéro de souche dans la collection originale ; nombre de spores viables par porteur ; taille D.
Ordre de grandeur D– la valeur du paramètre de stérilisation (durée ou dose absorbée), assurant une réduction du nombre de micro-organismes viables à 10 % de leur nombre initial. Cette valeur est logique pour des conditions de stérilisation expérimentales strictement définies. L'indicateur biologique doit contenir uniquement les micro-organismes spécifiés. Il est permis d'utiliser des indicateurs biologiques contenant plus d'un type de bactérie sur un même support. Des informations sur le milieu de culture et les conditions d'incubation doivent être fournies.
Il est recommandé de placer les indicateurs dans les zones les moins accessibles à l'agent stérilisant, préalablement déterminées empiriquement ou sur la base de données préliminaires. mesures physiques. Après exposition à l'agent stérilisant, le support de spores est transféré dans un milieu nutritif dans des conditions aseptiques.
L'utilisation d'indicateurs biologiques est autorisée production industrielle en ampoules fermées avec milieu nutritif, placées directement dans un emballage qui protège le milieu inoculé.
La sélection des micro-organismes de référence pour les indicateurs biologiques est réalisée en tenant compte des exigences suivantes :
- – la résistance de la souche testée à une méthode de stérilisation spécifique doit être supérieure à la résistance de tous les micro-organismes pathogènes et autres micro-organismes contaminant le produit ;
- – la souche testée doit être non pathogène ;
- – la souche testée doit être facile à cultiver.
Si une croissance de micro-organismes de référence est observée après l'incubation, cela indique un processus de stérilisation insatisfaisant.
Caractéristiques de l'utilisation d'indicateurs biologiques de stérilisation
Stérilisation à la vapeur saturée sous pression
Il est recommandé d'utiliser des indicateurs biologiques pour surveiller la stérilisation à la vapeur saturée sous pression lors de la validation des cycles de stérilisation. Utilisation recommandée Bacille stéarothermophile(par exemple, ATCC 7953, NCTC 10007, NCIMB 8157 ou CIP 52.81). Le nombre de spores viables doit dépasser 5 · 10 5 par porteur. Ordre de grandeur Dà une température de 121 °C devrait durer plus de 1,5 minutes. Lors du traitement d'un indicateur biologique avec de la vapeur à une température de (121 ± 1) °C sous une pression de 120 kPa pendant 6 minutes, il convient d'observer la conservation des spores viables et un traitement à la même température pendant 15 minutes doit conduire à la mort complète des micro-organismes de référence.
Stérilisation de l'air
Recommandé pour une utilisation dans la préparation d’indicateurs biologiques Bacille subtile(Par exemple, var. Niger ATCC 9372, NCIMB 8058 ou CIP 77.18). Le nombre de spores viables doit dépasser 1 ∙ 10 5 par porteur, la valeur Dà une température de 160 °C, cela dure 1 à 3 minutes. Souvent utilisé pour la stérilisation et la dépyrogénation des équipements en verre. air chaudà des températures supérieures à 220 °C. Dans ce cas, une réduction de 3 ordres de grandeur de la quantité d'endotoxines bactériennes résistantes à la chaleur peut remplacer les indicateurs biologiques.
Stérilisation par rayonnement
Les indicateurs biologiques peuvent être utilisés pour surveiller les opérations en cours comme mesure supplémentaire de l’efficacité d’une dose de rayonnement donnée, notamment dans le cas d’une stérilisation électronique accélérée. Litiges recommandés Bacille pumilus(par exemple, ATCC 27.142, NCTC 10327, NCIMB 10692 ou CIP 77.25). Le nombre de spores viables doit dépasser 1 ∙ 10 7 par porteur. Ordre de grandeur D devrait être supérieur à 1,9 kGy. Il convient de s'assurer qu'après irradiation de l'indicateur biologique avec une dose de 25 kGy (dose minimale absorbée), aucune croissance de micro-organismes de référence n'est observée.
Stérilisation au gaz
L'utilisation d'indicateurs biologiques est nécessaire pour toutes les procédures de stérilisation au gaz, tant pour la validation du cycle que pour les opérations de routine. Il est recommandé d'utiliser des spores Bacille subtile(Par exemple, var. Niger ATCC 9372, NCIMB 8058 ou CIP 77.18) lors de l'utilisation d'oxyde d'éthylène. Le nombre de spores viables doit dépasser 5 · 10 5 par porteur. Les paramètres de stabilité sont les suivants : magnitude D est supérieure à 2,5 minutes pour un test de cycle à une concentration d'oxyde d'éthylène de 600 mg/l, une température de 54 °C et une humidité relative de 60 %. Il convient de s'assurer qu'après un cycle de stérilisation de 60 minutes aux paramètres spécifiés, aucune croissance de micro-organismes de référence n'est observée, alors qu'après un cycle de stérilisation de 15 minutes à une température plus basse (600 mg/l, 30 °C, 60 % d'humidité ), la viabilité des spores demeure.
L'indicateur biologique doit être capable de détecter une humidité insuffisante dans le stérilisateur et le produit : lorsqu'elles sont exposées à de l'oxyde d'éthylène à une concentration de 600 mg/l à une température de 54 °C pendant 60 minutes sans humidification, la viabilité des spores doit rester .
ÉVALUATION DE L'EFFICACITÉ DES ANTISEPTIQUES ET DÉSINFECTANTS. DÉTERMINATION DE LA SENSIBILITÉ DES BACTÉRIES AUX MÉDICAMENTS ANTIMICROBIENS
Introduction. La destruction des microbes pathogènes pour l'homme est l'un des problèmes les plus importants dans la prévention et le traitement de diverses maladies. Pour lutter contre les microbes, des méthodes d'asepsie, d'antiseptiques, de désinfection et de thérapie antimicrobienne sont utilisées. Chaque méthode a ses propres finalités et conditions d’utilisation.
Thème 7.1. MÉTHODES D'ÉVALUATION DE L'EFFET ANTIMICROBIEN DE FACTEURS CHIMIQUES ET PHYSIQUES
Introduction.Asepsie - un système de mesures pour empêcher l'introduction (pénétration) de micro-organismes provenant de environnement dans les tissus ou les cavités corps humain lors de manipulations thérapeutiques et diagnostiques, ainsi que dans le matériel de recherche, en milieux nutritifs et cultures de micro-organismes dans les études de laboratoire. L'asepsie implique le respect de règles et de méthodes de travail sanitaires et hygiéniques particulières, ainsi qu'un traitement particulier des outils, des matériaux, des mains travailleurs médicaux, locaux, etc. dans le but de détruire partiellement (désinfection) ou complète (stérilisation) les microbes.
Antiseptiques- un ensemble de mesures thérapeutiques et préventives visant à détruire les micro-organismes pouvant provoquer un processus infectieux dans les zones endommagées de la peau et des muqueuses, en traitant avec des substances microbicides - antiseptiques.
Stérilisation- destruction complète des micro-organismes, y compris les formes végétatives et les spores. Il existe 3 grands groupes de méthodes de stérilisation : physique, mécanique et chimique. Le choix de la méthode utilisée pour résoudre un problème pratique dépend de l’objet à stériliser.
Désinfection- désinfection des objets environnementaux. Contrairement à la stérilisation, la désinfection tue la plupart des formes de microbes, mais pas toutes, et ne permet donc qu'une réduction de la contamination microbienne (contamination) plutôt qu'une désinfection complète de l'objet. Par conséquent, les objets désinfectés ne sont pas absolument sûrs.
▲ Plan
▲ Programme
1. Asepsie, antiseptiques et désinfection. Antiseptiques et désinfectants.
2. Effet antimicrobien de facteurs physiques et chimiques.
3. Méthodes de stérilisation ; matériel utilisé pour la stérilisation.
4. Méthodes de contrôle de l'efficacité de la stérilisation, de l'action des substances antiseptiques et désinfectantes.
Manifestation
1. Équipement utilisé pour la stérilisation : autoclave, armoire de séchage, équipement de filtration et d'irradiation UV.
UN Exerciceétudiants
1. Tenir compte des résultats des expériences réalisées avec des objets de test bactérien pour contrôler l'efficacité de la stérilisation réalisée par ébullition et autoclavage. Pour conclure.
2. Déterminez l'effet antibactérien des rayons UV sur les staphylocoques et E. coli à l'aide de cultures prêtes à l'emploi.
3. Tenir compte des résultats des expériences réalisées pour déterminer l'effet antimicrobien des substances antiseptiques et désinfectantes. Pour conclure.
Des lignes directrices
Méthodes de stérilisation
I. Méthodes physiques. Exposition à des températures élevées. La température élevée a un effet microbicide en raison de sa capacité à provoquer la dénaturation des biopolymères les plus importants, principalement les protéines.
Stérilisation par chaleur sèche dans une armoire de séchage et de stérilisation (Four Pasteur) est basé sur l'effet bactéricide de l'air chauffé à 165-170 °C pendant 45 minutes. À une température plus élevée, il se produit une carbonisation des tampons de coton et du papier dans lesquels la vaisselle est enveloppée, et à une température plus basse, cela est nécessaire long terme stérilisation. La chaleur sèche est utilisée pour stériliser la verrerie (boîtes de Pétri, tubes à essai, pipettes…).
Autoclavage- stérilisation à la vapeur d'eau surchauffée (avec hypertension artérielle) dans un stérilisateur à vapeur (autoclave). L'une des méthodes de stérilisation les plus efficaces, largement utilisée non seulement en microbiologie mais également en pratique clinique. Travailler avec un autoclave nécessite le strict respect d'instructions particulières et le respect des règles de sécurité. Température maximale la vapeur est mesurée à l'aide d'un thermomètre spécial, qui est placé dans un autoclave avec le matériel à stériliser. Dans certains cas, des produits chimiques ayant un certain point de fusion sont utilisés : benzonaphtol (PO °C), acide benzoïque (120 °C). De nombreux milieux nutritifs, pansements et linge sont stérilisés à une pression de 1 ATM pendant 15 à 20 minutes, les milieux nutritifs contenant des glucides - à 0,5 ATM pendant 15 minutes et la désinfection du matériel infecté est effectuée à 1,5 à 2 ATM pendant 20 à 25 minutes. min (tableau 7.1.1).
Tableau 7.1.1. La relation entre la pression, la température et la durée de stérilisation dans un stérilisateur à vapeur (autoclave)
0 100 30-60 (fractionnaire) 0,5 111 20-30
1 121 15-20 1,5 127 15-20
Stérilisation à la vapeur fluide réalisée en autoclave avec le couvercle dévissé et la vanne de sortie ouverte. Cette méthode de stérilisation repose sur l’effet antibactérien de la vapeur contre les cellules végétatives. Il est utilisé dans les cas où le matériel à stériliser ne peut pas résister à des températures élevées, par exemple des milieux nutritifs contenant des vitamines et des glucides. Pour une déstérilisation complète, le principe de la stérilisation fractionnée est utilisé, c'est-à-dire stériliser le matériau à 100 °C (ou 80-90 °C) pendant 20 à 30 minutes pendant 3 jours consécutifs. Dans ce cas, les cellules végétatives meurent et les spores sont préservées et germent en 1 jour. Double chauffage ultérieur assure une stérilité assez fiable du matériel.
Tyndalisation - Il s'agit d'une stérilisation fractionnée de matériaux à 56-58 °C pendant 1 heure pendant 5 à 6 jours consécutifs. Elle est utilisée pour la stérilisation de substances facilement détruites à haute température (sérum sanguin, vitamines, etc.).
Calcination à la flamme lampe à alcool ou brûleur à gaz
Les changements se limitent, par exemple, à stériliser les anses bactériologiques, les aiguilles à dissection, les pinces.
Exposition aux rayonnements ionisants. L’effet microbicide des rayonnements ionisants repose sur leur capacité à endommager la molécule d’ADN. Pour stériliser les instruments médicaux jetables et les équipements bactériologiques sensibles aux influences thermiques (plats en plastique pour la culture de microbes et de cultures cellulaires, seringues en plastique, systèmes de transfusion sanguine, etc.), la stérilisation par rayonnement y est généralement utilisée.
I. Méthodes mécaniques. Ils sont basés sur une filtration à travers des filtres à membrane spéciaux dotés de petits pores capables de retenir mécaniquement les micro-organismes. Dans la pratique de laboratoire, les filtres en papier et en polymère sont largement utilisés. Il existe des filtres avec des pores de différentes tailles, strictement calibrés, ce qui permet de garantir la purification du matériau non seulement des bactéries, mais aussi des virus, et, si nécessaire, de certaines macromolécules. La filtration est utilisée pour stériliser les matières liquides qui ne résistent pas à la chaleur (sérum sanguin, solutions de médicaments antimicrobiens, composants de milieux nutritifs pour bactéries et cultures cellulaires), afin d'obtenir des toxines bactériennes et d'autres déchets de bactéries. La filtration est la principale méthode de stérilisation de l’air dans les cas où elle est nécessaire. Pour ce faire, l'air passe à travers des filtres imprégnés de substances microbicides. De tels systèmes de stérilisation sont utilisés, par exemple, dans des boîtes de table pour travailler avec des agents pathogènes d'infections particulièrement dangereuses, ainsi que dans les salles d'opération, les maternités, etc.
III. Méthodes chimiques. Ils reposent sur le traitement d'un objet avec des produits chimiques ayant un effet microbicide et peuvent, sous réserve de certains régimes d'exposition, assurer la destruction complète de la microflore. La stérilisation chimique est généralement utilisée pour traiter divers dispositifs et instruments réutilisables et sensibles aux températures élevées (dispositifs à fibre optique, implants médicaux, etc.). Les agents stérilisants comprennent l'oxyde d'éthylène, le peroxyde d'hydrogène, le glutaraldéhyde, l'acide peroxyacétique et le dioxyde de chlore.
Quelle que soit la méthode utilisée, un contrôle régulier de l’efficacité de la procédure de stérilisation est requis dans tous les cas. À cette fin, des indicateurs biologiques sont utilisés - des micro-organismes connus qui sont les plus résistants à cette méthode de traitement (par exemple, les spores Bacille stéarothermophilus pour contrôler l'efficacité de l'autoclavage, Bacillus subtilis- pour contrôler la stérilisation par chaleur sèche). Il existe également des indicateurs physico-chimiques - des substances qui subissent des effets visibles
changements possibles (changement de couleur, état physique, etc.) uniquement si mode correct traitement.
Méthodes de désinfection
Des méthodes physiques et chimiques sont utilisées pour la désinfection.
I. Méthodes physiques. Exposition à des températures élevées
tournée.
Ébullition. Les seringues, les petits instruments chirurgicaux, les lames, les lamelles et quelques autres articles sont placés dans des stérilisateurs dans lesquels de l'eau est versée. Pour éliminer la dureté et augmenter le point d'ébullition, ajoutez une solution de bicarbonate de sodium à 1 à 2 % à l'eau. L'ébullition est effectuée pendant au moins 30 minutes. Lors de l'ébullition, certains virus (par exemple le virus de l'hépatite B) et les spores bactériennes restent viables.
Pasteurisation basé sur l'effet antibactérien de la température contre les cellules végétatives, mais pas contre les spores bactériennes. Le matériau est chauffé à une température de 50 à 65 "C pendant 5 à 10 minutes, suivi d'un refroidissement rapide. Les boissons et les produits alimentaires (vin, bière, jus de fruits, lait, etc.) sont généralement pasteurisés.
Exposition aux rayonnements ionisants. Rayonnement ultraviolet(UV) avec une longueur d'onde de 260 à 300 microns a un effet microbicide assez prononcé, cependant, certains types de microbes et de spores sont résistants aux UV. Par conséquent, l'irradiation UV n'est pas capable d'assurer une destruction complète de la microflore - stérilisation de l'objet. Le traitement UV est généralement utilisé pour la désinfection partielle (désinfection) d'objets de grande taille : surfaces d'objets, pièces, air dans les établissements médicaux, laboratoires de microbiologie, etc.
Rayonnement gamma a un effet microbicide prononcé sur la plupart des micro-organismes, y compris les formes végétatives de bactéries et les spores de la plupart des espèces, les champignons et les virus. Utilisé pour la stérilisation plats en plastique et instruments médicaux jetable. Il convient de garder à l’esprit que la radiothérapie gamma n’assure pas la destruction des agents infectieux tels que les prions.
II. Méthodes chimiques. C'est le traitement d'un objet avec désinfection
tami - produits chimiques microbicides. Quelqu'un
Certains de ces composés peuvent avoir des effets toxiques
sur le corps humain, ils sont donc utilisés exclusivement
Pour traiter des objets externes. Comme désinfectants
utilisez généralement du peroxyde d'hydrogène, contenant du chlore
unité (solution à 0,1-10 % d'eau de Javel, solution à 0,5-5 %
la chloramine, 0,1-10
% solution de deux tiers de sel basique hypo-
Chlorate de calcium - DTSGC), formaldéhyde, phénols (solution à 3-5% de phénol, lysol ou acide carbolique), iodophores. Le choix du désinfectant et sa concentration dépendent du matériel à désinfecter. La désinfection peut être une procédure suffisante pour désinfecter uniquement les instruments médicaux qui ne pénètrent pas les barrières naturelles du corps (laryngoscopes, cystoscopes, systèmes de ventilation artificielle des poumons). Certaines substances (acide borique, merthiolate, glycérine) sont utilisées comme conservateurs pour la préparation de sérums thérapeutiques et diagnostiques, de vaccins et d'autres médicaments.
Méthodes antiseptiques
Seuls les composés peu toxiques pour l'organisme et ayant un effet antimicrobien sont utilisés comme antiseptiques. Les plus couramment utilisés sont l'alcool éthylique à 70 %, une solution d'iode à 5 %, une solution de KMn0 4 à 0,1 %, des solutions alcooliques à 0,5 à 1 % de bleu de méthylène ou de vert brillant, une solution de chlorhexidine à 0,75 à 4,0 %, une solution d'hexachlorophène à 1 à 3 % et quelques autres. composés. Des substances antimicrobiennes sont également ajoutées aux matériaux utilisés dans la fabrication de pansements, de sparadraps, de prothèses dentaires, de matériaux d'obturation, etc. afin de leur conférer des propriétés bactéricides.
Méthodes de contrôle de l'efficacité de la stérilisation, de l'action des substances antiseptiques et désinfectantes. Etude de l'effet antibactérien des températures élevées. Placer les fils de soie humidifiés avec un mélange de cultures sporulées (3 tubes à essai) et non sporulées (3 tubes à essai) dans des tubes à essai avec un bouillon nutritif. Autoclaver ou faire bouillir un tube avec chaque culture ; N’exposez les tubes de contrôle à aucune influence. Après traitement, conserver toutes les cultures dans un thermostat à 37 ° C pendant 24 heures. Notez le résultat de l'expérience et tirez une conclusion.
Contrôle de la stérilité des pansements et des instruments chirurgicaux. Les échantillons à tester (ou prélèvements à la surface de gros instruments) sont ensemencés sur trois milieux : bouillon sucré, milieu thioglycolate et milieu Sabouraud liquide. Les cultures sont incubées dans un thermostat pendant 14 jours. S’il n’y a aucune croissance dans toutes les cultures, le matériel est considéré comme stérile.
Etude de l'effet antibactérien des rayons UV. Une suspension de staphylocoque ou E. coli Placer 1 ml dans une solution isotonique de chlorure de sodium à une distance de 10 à 20 cm du centre de la lampe. Les suspensions bactériennes irradiées et non irradiées (témoin) sont inoculées dans un bouillon nutritif et incubées
à 37"C pendant 16-24 heures, puis évaluer les résultats : l'absence de turbidité dans le milieu est associée à la mort de la culture bactérienne irradiée ; une turbidité est constatée dans le contrôle, ce qui indique la présence d'une croissance.
Détermination de l'effet antimicrobien des antiseptiques et des désinfectants. 1. Préparez deux types d'objets à tester : a) des fils de soie imbibés de culture E. coli; b) des fils de soie humidifiés avec une culture sporulée (à haute teneur en spores). Placer les fils dans des solutions de phénol (5%), Lysol (5%), eau de Javel (10%) pendant 5 et 60 minutes, puis laver les substances à tester, les inoculer dans un bouillon nutritif et placer dans un thermostat jusqu'au lendemain. . Échantillons de contrôle pour action substances chimiques ne pas exposer. Notez le résultat de l’expérience et tirez une conclusion.
2. Humidifiez les disques de papier filtre avec les solutions des substances à tester et placez-les sur la surface de la gélose nutritive dans une boîte de Pétri ensemencée (pelouse) avec une culture test de staphylocoques ou d'E. coli. Incuber le plat pendant 24 heures à 37 °C. L'effet antibactérien des substances étudiées est jugé par le diamètre des zones d'inhibition de la croissance bactérienne formées autour des disques.
Thème 7.2. MÉTHODES D'ÉVALUATION DE L'EFFICACITÉ DES MÉDICAMENTS ANTIMICROBIENS
Introduction. Les antimicrobiens (antibiotiques naturels et synthétiques) sont utilisés pour traiter les maladies causées par des micro-organismes. Pour un traitement efficace, il est nécessaire de sélectionner un médicament qui a la plus grande activité contre un agent infectieux donné et qui cause le moins de dommages à la microflore humaine normale. La large distribution de souches bactériennes présentant divers degrés de résistance à de nombreux médicaments (polyrésistance) rend particulièrement pertinente l'évaluation qualitative (méthode du disque) et quantitative (méthode de dilution en série) de la sensibilité des bactéries aux médicaments thérapeutiques.
▲ Programme
1. Spectres d'action des principaux groupes de médicaments antimicrobiens.
2. Évaluation de l'effet des médicaments antimicrobiens sur les bactéries à l'aide de la méthode du disque.
3. Détermination de la concentration minimale inhibitrice (CMI) des médicaments antimicrobiens par la méthode de dilutions en série.
UN. Manifestation
1. Médicaments antimicrobiens de divers groupes.
2. Disques de papier standards imprégnés d'agents antimicrobiens pour déterminer la sensibilité des bactéries à ceux-ci.
3. Tableaux et diagrammes des spectres antimicrobiens des groupes d'antibiotiques les plus importants et des mécanismes de leur action antibactérienne.
Devoir pour les étudiants
1. Réalisez une expérience pour déterminer la sensibilité des staphylocoques à divers antibiotiques en utilisant la méthode du disque.
2. Sur la base des résultats de l'expérience, déterminez la concentration minimale inhibitrice de pénicilline pour diverses cultures bactériennes en utilisant la méthode des dilutions en série.
Des lignes directrices
Détermination quantitative de la sensibilité des bactéries aux médicaments antimicrobiens par la méthode de dilutions en série.Cette méthode est utilisée pour déterminer la concentration minimale inhibitrice (CMI) - la concentration la plus faible d'un antibiotique qui supprime complètement la croissance de la bactérie étudiée. Préparer une solution mère de l'antibiotique contenant le médicament à une certaine concentration (µg/ml ou UI/ml) dans une solution physiologique ou tampon ou dans un solvant spécial. La solution mère est utilisée pour préparer des dilutions en série (2 fois) de l'antibiotique dans un milieu nutritif - bouillon (volume de 1 ml) ou gélose. Une suspension de densité standard est préparée à partir de la culture bactérienne étudiée et 0,1 ml est inoculée sur des milieux contenant différentes concentrations antibiotique, ainsi que sur un milieu sans médicament (contrôle de culture). Les cultures sont incubées à 37 °C pendant 20 à 24 heures ou plus (pour les bactéries à croissance lente), après quoi les résultats de l'expérience sont notés par la turbidité du bouillon nutritif ou l'apparition d'une croissance bactérienne visible sur la gélose, comparée La concentration la plus faible de l'antibiotique qui supprime complètement la croissance de la culture test est acceptée comme IPC.
La concentration la plus élevée du médicament qui empêche le développement du CPD ou l'accumulation d'antigènes pathogènes dans les cellules est considérée comme la CMI.
Interprétation des résultats, c'est-à-dire l'évaluation de la sensibilité clinique est effectuée sur la base des critères indiqués dans le tableau. 7.2.1. Les souches sensibles comprennent les souches de bactéries dont la croissance est inhibée aux concentrations de médicament présentes dans le sérum sanguin du patient lors de l’utilisation de doses thérapeutiques moyennes d’antibiotiques. Les souches modérément résistantes comprennent celles dont la suppression de la croissance nécessite des concentrations créées dans le sérum sanguin lors de l'administration de doses thérapeutiques maximales du médicament. Les micro-organismes résistants dont la croissance n'est pas supprimée par le médicament aux concentrations créées dans le corps lors de l'utilisation des doses maximales admissibles.
Tableau 7.2.1. Interprétation résultats de la détermination de la sensibilité des bactéries aux antibiotiques par la méthode de dilution en série
| Antibiotique | CMI (µg/ml) | ||
| sentir- | intermédiaire | rester- | |
| corps | précis | ciboulette | |
| (S) | (D | (R) | |
| Pénicillines | |||
| Benzylpénicilline : | |||
| pour les staphylocoques | 0,12 £ | - | >0,25 |
| pour d'autres bactéries | <1,5 | >1,5 | |
| Oxacilline | |||
| Pour Staphylococcus aureus | <2 | - | >4 |
| pour d'autres types de staphylocoques | <0,25 | - | >0,5 |
| Méticilline | <2 | - | >4 |
| Ampicilline : | |||
| pour les staphylocoques | <0,25 | - | >0,5 |
| Pour E. coli et autres entérobactéries | <8 | >32 | |
| Carbénicilline : | |||
| Pour E. coli et autres entérobactéries | <16 | >64 | |
| Pour Pseudomonas aeruginosa | <128 | >512 | |
| Piperacilline | |||
| Pour E. coli et autres entérobactéries | <16 | >64 | |
| Pour Pseudomonas aeruginosa | >64 | - | >182 |
| Azlocilline | <64 | - | >128 |
| Céphalosporines | |||
| Céfazoline | <8 | >32 | |
| Céphalothine | <8 | >32 | |
| Céfaclor | <8 | >32 | |
| Céphalexine | <8 | >32 | |
| Céfuroxime | <8 | >32 |
Continuation
intermédiaire (D
| Céfamandole | <8 | >32 | ||
| Céfotaxime | <8 | 16-32 | >64 | |
| Céftriaxone | <8 | 16-32 | >64 | |
| Céfopérazone | <16 | >64 | ||
| Ceftazidime | <8 | >32 | ||
| Céfépime | Nouvelle version bêta | <8 -лактамы | >32 | |
| Imipénème | <4 | >16 | ||
| Méropénème | <4 | >16 | ||
| Quinolones | ||||
| Acide nalidixique | SI6 | - | >32 | |
| Ciprofloxacine | <1 | >4 | ||
| Ofloxacine | <2 | >8 | ||
| Norfloxacine | <4 юзиды | >16 | ||
| Aminogli | ||||
| Kanamycine | <16 | >64 | ||
| Gentamicine | <4 | >16 | ||
| Tobramycine | <4 | >16 | ||
| Amikacine | <16 | >64 | ||
| Nétilmicine | <8 | >32 | ||
| Tétracyclines, macrolides, lincosamides | ||||
| Tétracycline | <2 | 4-8 | >16 | |
| Doxycycline | <4 | >16 | ||
| Érythromycine | 50,5 | 1-4 | >8 | |
| Azithromycine | <2 | >8 | ||
| Clarithromycine | <2 | >8 | ||
| Aléandomycine | <2 | >8 | ||
| Lincomycine | <2 | >8 | ||
| Clindamycine | <0,25 | 0,5 | >1 | |
| Antibiotiques d'autres groupes | ||||
| Chloramphénicol (lion | omycétine) | <8 | >32 | |
| Acide fusidique | <2 | 4-8 | >16 | |
| Rifampicine | <2 | >8 | ||
| Polymyxine | <50 ЕД/мл | >50 U/ml | ||
| Vancomycine | <4 | 8-16 | S32 | |
| Furadonine | <32 | >128 |
Systèmes de microtests pour déterminer la sensibilité aux médicaments antimicrobiens. Les systèmes de microtests sont conçus pour déterminer rapidement la sensibilité clinique aux antibiotiques des bactéries de certaines espèces ou groupes apparentés. Les médicaments testés en concentrations standards sont situés dans les puits de plaques en plastique prêtes à l'emploi. La sensibilité de la culture test à deux concentrations de chaque antibiotique est déterminée : thérapeutique moyenne et maximale. A l'aide d'une anse de mesure bactériologique (volume 1 µl), le matériel d'une colonie isolée est ajouté à 5 ml d'un milieu nutritif standard contenant un indicateur, et une suspension est préparée. La suspension bactérienne finie est versée dans des puits de 0,1 ml d'une plaque et incubée dans des conditions optimales de température et de composition gazeuse pour le type de bactérie donné. La croissance des bactéries est jugée par le changement de couleur de l'indicateur, ce qui peut réduire considérablement le temps de recherche. Si les bactéries restent viables en présence d'un antibiotique, la libération de produits métaboliques entraîne une modification de la couleur de l'indicateur. L'absence de changement de couleur indique une suppression complète de l'activité microbienne. Les résultats sont déterminés après 4 heures d'incubation à l'aide d'un spectrophotomètre.
Détermination de la sensibilité clinique des bactéries aux médicaments antimicrobiens par la méthode du disque (test de diffusion). La méthode est basée sur la suppression de la croissance des bactéries sur un milieu nutritif solide sous l'influence d'un antibiotique contenu dans un disque en papier. À la suite de la diffusion du médicament dans la gélose, un gradient de concentration d’antibiotique se forme autour du disque. La taille de la zone d'inhibition de croissance dépend de la sensibilité de la bactérie et des propriétés du médicament (notamment la vitesse de diffusion dans la gélose). Pour déterminer la sensibilité dans la pratique clinique, des disques standard prêts à l'emploi avec une teneur en antibiotiques strictement définie sont utilisés. Le contenu du médicament est déterminé en fonction des concentrations thérapeutiques de chaque antibiotique et des valeurs CMI moyennes des bactéries pathogènes. Le nom du médicament et sa quantité sont indiqués sur chaque disque. Pour déterminer la sensibilité, une suspension contenant un nombre standard de cellules viables est préparée à partir de la culture bactérienne étudiée et la pelouse est inoculée dans des boîtes de Pétri (diamètre 100 mm) en milieu Mueller-Hinton ou AGV (milieux spéciaux qui n'interfèrent pas avec la diffusion de substances antimicrobiennes et n'ont pas d'effet négatif sur celles-ci ). Les disques sont appliqués sur la surface ensemencée à l'aide d'un applicateur à une distance de 2,5 cm du centre de la coupelle en cercle (Fig. 7.2.1). Ne placez pas plus de 5 disques sur une tasse. Les cultures sont incubées pendant 18 à 20 heures à 35 C. Si la procédure est effectuée correctement, sur fond de pelouse bactérienne uniforme,
Zones d'inhibition de croissance de forme ronde. Les résultats sont pris en compte par la mesure du diamètre de la zone d'inhibition de croissance. La zone à mesurer est considérée comme la zone où la croissance bactérienne est totalement absente. L'interprétation des résultats obtenus (conclusion sur la sensibilité) est réalisée sur la base des critères donnés dans le tableau. 7.2.2.
Tableau 7.2.2. Interprétation des résultats de détermination de la sensibilité des bactéries aux antibiotiques par la méthode du disque (sur milieu AGV)
Pénicillines
| Benzylpénicilline : | ||||
| lors du test des staphylocoques | 20 £ | 21- | -28 | >29 |
| lors du test d'autres bactéries | 10 £ | 11- | -16 | 17 £ |
| Ampicilline : | ||||
| lors du test des staphylocoques | <20 | 21- | -28 | 29 £ |
| lors d'un test Gram négatif | ||||
| bactéries rénales et entérocoques | <9 | 10- | -13 | >14 |
| Carbénicilline (25 mcg) | 14 £ | 15- | -18 | >19 |
| Carbénicilline (100 mcg) à | ||||
| test P. aeruginosa | 11 £ | 12- | -14 | 15 £ |
| Méticilline | 13 £ | 14- | -18 | >19 |
| Oxacilline (10 mcg) | $15 | 16- | -19 | 20 £ |
| Azlocilline (pour P. aeruginosa) | 13 £ | 14- | -16 | 16 £ |
| Pipéracilline (pour P. aeruginosa) | <17 | >18 | ||
| Aztréons | <15 | 16- | -21 | 22 £ |
Céphalosporines
Continuation
| Antibiotique | Diamètre | zones de retard de croissance | |
| (mm) | |||
| sentir- | intermédiaire | rester- | |
| corps | précis | ciboulette | |
| (S) | (D | (R) | |
| Nouvelles bêta-lactamines | |||
| Imipénème*<13 | 14-15 | >16 | |
| Méropénem*<13 | 14-15 | >16 | |
| Quinolones | |||
| Ciprofloxacine<15 | 16-20 | >21 | |
| Ofloxacine<12 | 13-16 | >17 | |
| Acide nalidixique*<12 | 13-17 | >18 | |
| Aminoglycosides | |||
| Streptomycine<16 | 17-19 | >20 | |
| Kanamycine<14 | 15-18 | >19 | |
| Gentamicine 15 £ | - | >16 | |
| Sizomycine<15 | - | >16 | |
| Tobramycine<14 | - | >15 | |
| Amikacine<14 | 15-16 | >17 | |
| Nétilmicine<12 | 13-14 | >15 | |
| Tétracyclines, macrolides, lincosamides | |||
| Tétracycline<16 | 17-20 | >22 | |
| Doxycycline<15 | 16-19 | >20 | |
| Érythromycine<17 | 18-21 | >22 | |
| Azithromycine<13 | 14-17 | >18 | |
| Roxithromycine*<14 | 15-18 | >19 | |
| Clarithromycine* 13 £ | 14-17 | >18 | |
| Lincomycine<19 | 20-23 | 24 £ | |
| Clindamycine 14 £ | 15-20 | >21 | |
| Oléandomycine 16 £ | 17-20 | >21 | |
| Antibiotiques d'autres groupes | |||
| Chloramphénicol<15 | 16-18 | >19 | |
| Acide fusidique<16 | 17-20 | >21 | |
| Rifampicine<12 | 13-15 | >16 | |
| Polymyxine<11 | 12-14 | >15 | |
| Vancomycine : | |||
| pour les staphylocoques<11 | - | >12 | |
| pour les entérocoques<14 | 15-16 | >17 | |
| Ristomycine<9 | 10-11 | >12 | |
| Furadonine 15 £ | 16-18 | >19 | |
| Furagine 15 £ | 16-18 | >19 |
*Données préliminaires.
L'utilisation de la méthode du disque présente un certain nombre de limitations. La méthode ne convient que pour déterminer la sensibilité des bactéries à croissance rapide qui forment une pelouse homogène en 24 heures sur un milieu nutritif dense standard de composition assez simple (Muller-Hinton ou AGV), qui ne contient pas de substances pouvant réduire la l’activité des antibiotiques ou interférer avec leur diffusion. Sinon, les informations reçues ne seront pas fiables.
Ainsi, la méthode du disque ne peut pas être utilisée pour déterminer la sensibilité aux antibiotiques de toutes les bactéries à croissance lente et les plus exigeantes, qui comprennent de nombreux agents pathogènes humains. (Mycobacterium spp., Helicobacter spp., Bacteroides spp., Prevotella spp., Brucella spp., Mycoplasma spp. et plein d'autres). Pour déterminer la sensibilité de certaines bactéries exigeantes pour lesquelles des tests standards ont été développés (Haemophilus spp., Neisseria spp., certains types de streptocoques), des milieux de culture spéciaux et des critères supplémentaires doivent être utilisés lors de l'interprétation des résultats obtenus.
La méthode du disque ne donne pas non plus de résultats fiables pour déterminer la sensibilité des bactéries aux médicaments qui diffusent mal dans la gélose, par exemple les antibiotiques polypeptidiques (polymyxine, ristomycine).
Détermination quantitative de la sensibilité bactérienne aux médicaments antimicrobiens à l'aide du test E. Le E-test est une variante de la méthode de diffusion qui permet de déterminer la CMI d'un antibiotique. Au lieu de disques, on utilise des bandes de polymère standards, préparées à l'aide d'une technologie spéciale (AB BIODISK) et contenant des médicaments antimicrobiens immobilisés appliqués sous la forme d'un gradient de concentration continu. De l'autre côté du Strip
Tableau 7.2.3. Détermination de la CMI des médicaments antimicrobiens par méthode de dilution en série
Le test électronique montre une échelle de valeurs MIC. Lorsque la bandelette est placée sur la surface de la gélose, un processus de diffusion contrôlé garantit qu'un gradient stable de concentration de médicament correspondant au tartre est créé dans le milieu nutritif autour de la bandelette. La procédure de détermination de la sensibilité à l'aide du test E est effectuée de la même manière que le test utilisant la méthode du disque. Après incubation de la culture, une zone d'inhibition de croissance se forme autour de la bande, ayant la forme d'une ellipse. La valeur MIC correspond à l’intersection de la zone ellipsoïdale avec la bandelette E-test. Pour interpréter les résultats (évaluation de la sensibilité clinique), des critères standards sont utilisés (Tableau 7.2.3).
ECOLOGIE DES MICRO-ORGANISMES
Introduction. L'écologie des micro-organismes est une branche de la microbiologie générale et étudie les relations entre micro- et macro-organismes vivant ensemble dans certains biotopes. Dans les habitats naturels (sol, eau, air, organismes vivants), les microbes font partie de diverses biocénoses. L’écologie des microbes responsables des maladies humaines est déterminée par leur capacité à survivre dans environnement externe, changer d'hôte, persister dans le corps de l'hôte sur fond d'action système immunitaire, et est également associé aux méthodes de leur distribution, de leur transmission et à un certain nombre d'autres facteurs. L'évaluation d'une gamme de conditions environnementales est l'une des tâches principales de la microbiologie sanitaire.
Les études sanitaires et bactériologiques constituent la base Travaux pratiques médecins hygiénistes et épidémiologistes dans l'évaluation sanitaire et hygiénique des objets environnementaux, des produits alimentaires, des boissons, etc. et jouent un rôle de premier plan dans la prévention des maladies infectieuses. Un objet d'étude important de la microbiologie médicale est la microflore normale du corps humain, qui comprend les microbes qui vivent sur la peau, les muqueuses de divers organes (cavité buccale, pharynx, nasopharynx, voies respiratoires supérieures, intestins, notamment le côlon, etc. .). Certains d'entre eux sont constant (obligatoire) habitants du corps humain, d'autres - temporaire (facultatif ou transitoire). La microflore normale est un système vital de l'organisme qui assure la protection contre de nombreux microbes pathogènes, la maturation et la stimulation du système immunitaire, la production d'un certain nombre de vitamines et d'enzymes impliquées dans la digestion, etc.
La composition qualitative et quantitative de la microflore humaine change tout au long de la vie et dépend du sexe, de l'âge, de l'alimentation, etc. De plus, les fluctuations de la composition de la microflore humaine peuvent être causées par l'apparition de maladies et l'utilisation de médicaments, principalement des antibiotiques. et immunomodulateurs. L'évaluation de la composition qualitative et quantitative de la microflore du corps humain selon certains indicateurs permet d'identifier sa violation (dysbactériose) et les conséquences associées.
Thème 8.1. MICROFLORE DE L'EAU, DE L'AIR ET DU SOL. MÉTHODES D'ÉTUDE SANITAIRE ET BACTÉRIOLOGIQUE DE L'EAU, DE L'AIR ET DU SOL
g Programme
1. Microflore de l'eau, de l'air et du sol.
2. Micro-organismes indicateurs sanitaires et leur importance.
3. Méthodes de détermination de l'indice de coli, du titre de coli et du nombre microbien de l'eau.
4. Méthodes de détermination de la quantité microbienne de l'air.
5. Méthodes de détermination du titre de perfringens, du titre de coli et du nombre microbien du sol.
UN Manifestation
1. Examen sanitaire et bactériologique de l'eau par la méthode du filtre à membrane.
2. Etude sanitaire et bactériologique de l'air. L'appareil de Krotov. Croissance de micro-organismes sur MPA en boîte de Pétri. Croissance de streptocoques hémolytiques sur gélose au sang.
3. Etude sanitaire et bactériologique du sol. Hauteur Protée vulgaire(selon Choukevitch).
UN Devoir pour les étudiants
1. Effectuer une évaluation de l'état sanitaire et bactériologique de l'eau sur la base des résultats de la détermination du nombre microbien, de l'indice de coli et du titre de coli.
2. Effectuer une évaluation de l'état sanitaire et bactériologique de l'air sur la base des résultats de la détermination du nombre microbien.
3. Évaluer l'état sanitaire et bactériologique du sol sur la base des résultats de la détermination du nombre microbien, du titre de coli, du titre de perfringens et du titre de bactéries thermophiles.
4. Semer le lavage de la peau des mains sur un milieu glucose-peptone.
▲ Lignes directrices
Méthodes microbiologiques pour la recherche environnementale
Pour évaluer l'état sanitaire et hygiénique de divers objets environnementaux, eau, produits alimentaires, etc., des études sanitaires et bactériologiques sont réalisées dont le but est de déterminer le danger épidémique. Cependant, la détection directe de microbes pathogènes est associée à un certain nombre de difficultés, principalement dues à la faible concentration de ces microbes, qui ne peuvent généralement pas se reproduire dans l'air, l'eau ou le sol. Par conséquent, dans la pratique sanitaire et microbiologique, des méthodes indirectes sont utilisées, basées sur la détermination de la contamination microbienne totale de l'un ou l'autre objet et sur la détection de ce qu'on appelle bactéries indicatrices sanitaires(Tableau 8.1.1).
Tableau 8.1.1. Bactéries indicatrices sanitaires de l’environnement et des produits alimentaires
| Un objet | Nature de la pollution | Bactéries indicatrices sanitaires |
| Eau | Fécal | Bactéries coli Escherichia coli, Citrobacter freundii, Enterobacter aerogenes, Enterococcus faecalis |
| Le sol | Même | Les mêmes bactéries et clostridies (Clostridium perfringens, CI. sporogènes et etc.) |
| Industriel-domestique | Bactéries thermophiles Protée | |
| élevé (déchets en décomposition) | vulgaris | |
| Nourriture | Fécal | |
| des produits | médaillon S. faecalis, P. vulgaris | |
| Goutte à goutte orale | Staphylococcus aureus | |
| Articles | Fécal | Bactéries du groupe des maladies intestinales |
| vie courante | casier, P. vulgaris, E. faecalis | |
| Goutte à goutte orale | S. aureus | |
| Air | Même | S. aureus, S. pyogènes |
| Eau, | Industriel | La production exerce des pressions micro- |
| le sol, | robes | |
| air |
Microbes indicateurs sanitaires indiquant contamination fécale l'environnement sont des bactéries coliformes (coliformes). Ils appartiennent à différents genres de la famille Entérobactéries. Les signes diagnostiques différentiels des coliformes sont présentés dans le tableau. 8.1.2. Détection d'E.coli dans tout objet environnemental ou produits alimentaires considéré comme l’indicateur le plus fiable de contamination fécale fraîche. Présence de genres de bactéries Citrobactérie Et Entérobactérie indique une contamination fécale relativement ancienne. La présence de Clostridium perfringens, C. sporogens et autres clostridies dans le sol indique sa contamination fécale, aussi bien récente qu'ancienne, puisque ces bactéries forment des spores, ce qui leur permet de persister longtemps dans l'environnement (notamment dans le sol). ). Détection dans les objets environnementaux Enterococcus faecalis indique également leur contamination fécale. Le groupe des bactéries thermophiles comprend des bactéries non apparentées, représentatives de diverses familles, capables de se reproduire à des températures de 60°C et plus. (Lactobacillus lactis, Streptococcus thermophilus et etc.). Ils ne sont pas des habitants permanents de l'intestin humain et ne servent pas de critères de pollution fécale de l'environnement. Une forte augmentation du nombre de ces bactéries peut indiquer une contamination du sol par des déchets en décomposition, car elles se multiplient dans le fumier et les composts auto-échauffants.
Tableau 8.1.2. Signes diagnostiques différentiels de la maladie des coliformes
Escherichia Mélange + - +
coli acides
Citrobactérie Idem + - r + +
amis
Entérobactérie Butane - - + - + +
aérogènes diol
Légende : (+) - réaction positive, (-) - réaction négative, p - réactions diverses.
Bactéries appartenant au genre Protée (P. vulgaris etc.) les familles Entérobactéries largement répandu dans la nature. Ces bactéries putréfactives se retrouvent en grand nombre sur les restes en décomposition d’animaux et de plantes. La détection de ces bactéries dans tout produit alimentaire indique pourriture putride.
Streptocoques hémolytiques (S.pyogenes),étant des habitants de transit du nasopharynx et du pharynx, ils sont excrétés avec des gouttelettes de mucus par les gouttelettes en suspension dans l'air. La durée de survie des streptocoques hémolytiques dans l'environnement n'est pratiquement pas différente de celle caractéristique de la plupart des autres agents pathogènes des infections aéroportées. La détection de streptocoques hémolytiques dans l'air intérieur indique sa possible contamination par des microbes contenus dans le pharynx, le nasopharynx et les voies respiratoires supérieures de l'homme et sont des agents responsables d'infections aéroportées. Staphylococcus aureus est un habitant facultatif du nasopharynx, du pharynx et de la peau humaine. Sa présence dans l'air intérieur ou sur des objets qui s'y trouvent est un indicateur pollution aéroportée. La détection simultanée de Staphylococcus aureus et de streptocoques hémolytiques indique un degré élevé de pollution atmosphérique.
Examen sanitaire et bactériologique de l'eau
Détermination du nombre microbien de l'eau. L'eau du robinet est inoculée dans un volume de 1 ml, l'eau provenant de réservoirs ouverts - dans un volume de 1,0 ; 0,1 et 0,01 ml. Tous les échantillons sont ajoutés à des boîtes de Petri stériles, après quoi ils sont remplis de 10 à 12 ml de gélose nutritive fondue et refroidie à 45-50°C, qui est soigneusement
Mélanger soigneusement avec de l'eau. Les cultures sont incubées à 37 °C pendant 1 à 2 jours. L'eau des réservoirs ouverts est inoculée en parallèle sur deux séries de boîtes, dont l'une est incubée à 37 °C pendant 1 jour et l'autre pendant 2 jours à 20 °C. Ensuite, le nombre de colonies cultivées en surface et en profondeur du milieu est compté et calculé. nombre microbien de l'eau- nombre de micro-organismes dans 1 ml.
Détermination du titre coli et de l'indice coli de l'eau. Titre de coli eau - la quantité minimale d'eau (ml) dans laquelle les coliformes sont détectés. Indice de Coli- la quantité de coliformes dans 1 litre d'eau. Ces indicateurs sont déterminés par la méthode de titrage (fermentation) ou la méthode du filtre à membrane.
Méthode de titrage. Différents volumes d'eau sont inoculés dans un milieu glucose-peptoné (eau peptonée à 1 %, solution de glucose à 0,5 %, solution de chlorure de sodium à 0,5 %, indicateur Andrede et flotteur), et pour inoculer de grandes quantités (100 et 10 ml), un milieu concentré est utilisé, contenant des quantités 10 fois supérieures de ces substances.
L'eau des réservoirs à surface ouverte est examinée en volumes de 100 ; dix; 1,0 et 0,1 ml. Pour la recherche eau du robinet inoculer trois volumes de 100 ml, trois volumes de 10 ml et trois volumes de 1 ml. Les cultures sont incubées pendant 1 jour à 37 °C. La fermentation est jugée par la présence de bulles de gaz dans le flotteur. Les échantillons fermentés ou troubles sont inoculés sur milieu Endo. Des frottis sont réalisés à partir des colonies cultivées, colorées selon la méthode de Gram et un test à l'oxydase est réalisé, ce qui permet de différencier les bactéries des genres Escherichia, Citrobacter Et Entérobactérie provenant de bactéries Gram-négatives de la famille des Pseudomonadaceae et d'autres bactéries oxydase-positives vivant dans l'eau. A cet effet, 2 à 3 colonies isolées sont prélevées de la surface du milieu à l'aide d'une tige de verre et étalées sur du papier filtre imbibé de di-méthyl-p-phénylènediamine. Si le test oxydase est négatif, la couleur du papier ne change pas ; si le test oxydase est positif, il devient rouge. Couleur bleue dans 1 minute. Les bâtonnets Gram négatifs qui ne forment pas d'oxydase sont à nouveau examinés lors d'un test de fermentation - ajoutés à de la gélose nutritive semi-liquide avec 0,5 % solution de glucose et incubée à 37 ° C pendant 1 jour. Si le résultat est positif, le titre coli et l'indice coli sont déterminés selon le tableau statistique. 8.1.3.
Méthode de filtre à membrane. Le filtre à membrane n°3 est placé dans un entonnoir Seitz monté dans un flacon Bunsen, qui est relié à une pompe à vide. Les filtres à membrane sont pré-stérilisés par ébullition dans de l'eau distillée. L'eau du réseau d'adduction d'eau et l'eau des puits artésiens sont filtrées dans un volume de 333 ml. L'eau propre d'un réservoir ouvert est filtrée dans des volumes de 100, 10, 1,0 et 0,1 ml ; l'eau plus contaminée est diluée avec de l'eau stérile avant filtration.
Tableau 8.1.3. Détermination de l'indice de bactéries coliformes lors de l'analyse de l'eau
Titre de coli
de 3 volumes de 100 ml
eau. Ensuite, les filtres sont placés à la surface du milieu Endo dans des boîtes de Petri et après incubation à 37 °C pendant 1 jour, le nombre de colonies cultivées typiques des coliformes est compté. Des frottis sont préparés à partir de 2 à 3 colonies rouges, colorées selon la méthode Gram, et l'activité oxydase est déterminée. Pour ce faire, le filtre sur lequel se sont développées des colonies de bactéries est transféré à l'aide d'une pince à épiler, sans le retourner, sur un cercle de papier filtre imbibé de diméthyl-p-phénylènediamine. En présence d’oxydase, l’indicateur fait virer la colonie au bleu. 2-3 colonies n'ayant pas changé leur couleur d'origine sont inoculées en milieu semi-liquide avec une solution de glucose à 0,5%. Les cultures sont incubées pendant 24 heures à 37 °C. En cas de formation de gaz, comptez le nombre de colonies rouges sur le filtre et déterminez l'indice de coli. Indicateurs standards pour boire de l'eau sont donnés dans le tableau. 8.1.4.
Tableau 8.1.4. Normes pour l'eau potable (GOST 2874-82)
| Standard |
Indice
Nombre de microbes dans 1 ml d'eau, pas plus de 100
Le nombre de bactéries coliformes dans 1 litre d'eau est de 3
(indice coli), pas plus
Pour déterminer le titre Enterococcus faecalis préparer des dilutions de 10 fois avec de l'eau. De l'eau entière et ses dilutions dans un volume de 1 ml sont inoculées dans l'un des milieux électoraux liquides (KF, poly-
Myxinovaya, etc.), incubés à 37 °C pendant 2 jours, après 24 et 48 heures ils sont ensemencés sur des milieux denses différentiels sélectifs : gélose KF, gélose TTX (milieu au chlorure de triphényltétrazolium), gélose polymyxintellurite. Les streptocoques sont identifiés. le type de colonies, la morphologie cellulaire et la coloration de Gram. Sur un milieu au TTX, les streptocoques forment des colonies rouge foncé, sur gélose au tellurite - noir.
Composition des médias Milieu KF : 2 % de gélose nutritive, 1 % d'extrait de levure, 2 % de lactose, 0,4 % d'azoture de sodium, 0,06 % de carbonate de sodium, indicateur rouge de bromocrésol.
Milieu polymyxine : 2% gélose nutritive, 1% extrait de levure, 1% glucose, polymyxine M 200 U/ml, indicateur bleu de bromothymol.
Gélose polymyxintellurite : 2 % de gélose nutritive, 1 % d'extrait de levure, 1 % de glucose, cristal violet 1:800 000, polymyxine M 200 U/ml, 0,01 % de tellurite de potassium.
Gélose au chlorure de triphényltétrazolium (TTC) : 2 % de gélose nutritive, 1 % d'extrait de levure, 1 % de glucose, cristal violet 1 : 800 000, 0,01 % de TTX.
Lors de la définition d'un index E. faecalis utiliser les tableaux statistiques utilisés pour établir l’indice coli. De plus, la méthode du filtre à membrane est utilisée à cet effet. Pour détecter les bactéries pathogènes, l'eau passe à travers des filtres à membrane, qui sont ensuite placés dans des milieux liquides sélectifs ou à la surface de milieux denses de diagnostic différentiel.
Etude sanitaire et bactériologique de l'air
Détermination du nombre microbien de l'air. Les méthodes microbiologiques quantitatives pour la recherche sur l'air reposent sur les principes de dépôt (sédimentation), d'aspiration ou de filtration.
Méthode de sédimentation. Deux boîtes de Petri avec gélose nutritive sont laissées ouvertes pendant 60 minutes, après quoi les cultures sont incubées dans un thermostat à 37 ° C. Les résultats sont appréciés par le nombre total de colonies cultivées sur les deux boîtes : s'il y a moins de 250 colonies, l'air est considéré comme propre, 250 à 500 colonies indiquent une contamination modérée, si le nombre de colonies est supérieur à 500 - contaminées.
Méthode d'aspiration. Il s’agit d’une méthode quantitative plus précise pour déterminer le nombre microbien de l’air. L'ensemencement aérien est effectué à l'aide d'instruments. L'appareil de Krotov (Fig. 8.1.1) est conçu de telle manière que l'air est aspiré à une vitesse donnée à travers une fente étroite d'une plaque de plexiglas recouvrant une boîte de Pétri de gélose nutritive.
Figure 8.1.1. Appareil Krotov pour la recherche bactériologique
Dans ce cas, les particules d'aérosol contenant des micro-organismes sont uniformément fixées sur toute la surface du milieu en raison de la rotation constante de la coupelle sous la fente d'entrée. Après incubation de la culture dans un thermostat, le nombre microbien est calculé à l'aide de la formule :
un x 1000 x ~ y
où a est le nombre de colonies cultivées sur la boîte ; V est le volume d'air traversant l'appareil, dm 3 ; 1000 - volume d'air standard, dm 3.
Lors de la détermination du nombre microbien de l'air, une gélose nutritive est utilisée pour isoler les streptocoques hémolytiques - une gélose au sang additionnée de violet de gentiane, suivie d'une microscopie de contrôle et d'une sous-culture sélective de colonies suspectes sur une gélose au sang.
Composition des médias Gélose au sang violet de gentiane : 2 % de gélose nutritive, 5 à 10 % de sang de cheval, de lapin ou de mouton défibriné, violet de gentiane (1:50 000).
Gélose au sel de jaune (YSA) : 2 % de gélose nutritive, 10 % de chlorure de sodium, 20 % (en volume) suspension de jaune d'œuf (1 jaune d'œuf de poule pour 200 ml de solution isotonique de chlorure de sodium).
D'autres instruments peuvent être utilisés pour étudier l'air (Dyakov, Rechmensky, Kiktenko, PAB-1 - échantillonnage-
Nick aérosol bactériologique, POV-1 - un dispositif d'échantillonnage de l'air), à l'aide duquel un certain volume d'air passe à travers des liquides ou des filtres, puis des inoculations mesurées sont effectuées sur des milieux nutritifs. L'utilisation de PAB-1 et POV-1 permet d'examiner de grands volumes d'air et de détecter des bactéries et virus pathogènes.
Lors de l'examen de l'air des hôpitaux (chirurgicaux, obstétricaux-gynécologiques, etc.), ils isolent directement les bactéries pathogènes et opportunistes - agents responsables des infections nosocomiales (staphylocoques, Pseudomonas aeruginosa, etc.). Lorsque des infections nosocomiales d'étiologie staphylococcique surviennent, des études sont menées visant à identifier les sources et les voies de propagation des infections : par lysotypage, l'identité des staphylocoques isolés des objets environnementaux, ainsi que des patients et du personnel de service, est déterminée. Indicateurs standards du nombre et du contenu microbien Staphylococcus aureus,
Méthodes de stérilisation
STÉRILISATION. OSC.
Stérilisation– il s’agit de la destruction des formes végétatives et sporulées des micro-organismes présents dans le matériel stérilisé.
Tous les produits qui entrent en contact avec la surface de la plaie, entrent en contact avec du sang ou des médicaments injectables, ainsi que certains types d'instruments médicaux qui, pendant le fonctionnement, entrent en contact avec les muqueuses et peuvent causer des dommages sont soumis à la stérilisation.
L'utilisation de méthodes de stérilisation de dispositifs médicaux dans les organisations médicales, actuellement autorisées dans la Fédération de Russie, n'est valable que lors de l'utilisation d'équipements et de moyens enregistrés de la manière prescrite, en présence de régimes de stérilisation développés pour des types de produits spécifiques.
Méthodes de stérilisation
Méthodes physiques: vapeur, air, rayonnement (faisceau - rayons gamma et rayonnement bêta), ultrasons, énergie rayonnante du domaine optique (rayonnement infrarouge, visible et ultraviolet), plasma (plasma froid apparaissant dans la vapeur de peroxyde d'hydrogène dans le champ électromagnétique du micro-ondes), glasperlène (en utilisant des billes de verre chauffées).
Méthodes chimiques: l'utilisation de solutions de produits chimiques à large spectre antimicrobien et de gaz.
Aucune de ces méthodes n'est universelle, chacune d'elles présente certains avantages et inconvénients.
Méthode à la vapeur (autoclavage) est assuré par des stérilisateurs à vapeur (Fig. 6) de différentes tailles avec à des degrés divers automatisation.
Riz. 6
1er mode : température – 132 0 C, pression – 2 atm., temps – 20".
Le premier mode (principal) est destiné à la stérilisation des produits en calicot, en gaze (matériau de pansement, lin, etc.), en verre et en produits en métal résistant à la corrosion.
2ème mode : température – 120 0 C, pression – 1,1 atm., temps – 45".
Tous les produits stérilisés à la vapeur sous pression sont d'abord placés dans des emballages spéciaux - boîtes de stérilisation (boîtes ou conteneurs) avec ou sans filtres (Fig. 7), emballages en tissu de coton double épaisseur ou sacs Kraft et étiquetés. Pour que la vapeur pénètre bien en différents points de la chambre de stérilisation, il est important de respecter les normes de chargement du stérilisateur et des bacs. La durée de conservation de la stérilité dépend de l'emballage. Les bix se conservent 3 jours sans filtre, et 20 jours avec filtre. Les emballages en tissu de coton double épaisseur ou en sacs Kraft sont conservés jusqu'à 3 jours dans des conditions stériles.
Riz. 7
Avantages de la méthode: Grâce à la stérilisation des produits emballés, la possibilité de contamination répétée par des micro-organismes (recontamination) des produits stérilisés pendant le transport est réduite. La méthode est fiable, non toxique et a un effet doux sur le matériau stérilisé.
Défauts: humidification des produits stérilisés, corrosion des produits métalliques, ce qui aggrave les conditions de stockage et augmente la possibilité de recontamination pendant le stockage.
Seuls les travailleurs médicaux ayant suivi une formation spéciale et disposant du document approprié ont le droit de travailler avec ce matériel de stérilisation.
Méthode aérienne La stérilisation est recommandée pour les produits en métal et en verre. Les produits secs conditionnés en emballages en papier de sac non imprégné, en papier de sac résistant à l'humidité, en papier pour l'emballage de produits dans des machines de marque « E » ou sans emballage (dans des conteneurs ouverts) sont soumis à la stérilisation. Les produits stérilisés dans du papier peuvent être conservés 3 jours ; Les produits stérilisés sans papier doivent être utilisés immédiatement après la stérilisation. Deux modes de stérilisation sont le plus souvent utilisés :
1er mode: température – 180 0 C, temps – 60" ;
2ème mode: température – 160 0 C, temps – 150".
L'efficacité de cette méthode de stérilisation est assurée par la pénétration uniforme de l'air chaud dans les produits stérilisés, obtenue par une ventilation forcée de l'air dans la chambre et le respect des normes de chargement.
Avantages: Lors de la stérilisation par voie aérienne, les produits et les emballages ne sont pas humidifiés, ce qui élimine la corrosion des métaux et réduit le risque de recontamination pendant le stockage.
Défauts: chauffage lent et inégal des produits, la nécessité d'utiliser des températures plus élevées, l'impossibilité de stériliser les produits en caoutchouc et en polymères, ainsi que la possibilité de recontamination pendant le transport des produits.
Les méthodes de stérilisation à la vapeur et à l’air sont respectueuses de l’environnement.
Mode opératoire des stérilisateurs d'air (fours à chaleur sèche)
2. Chauffage.
3. Stérilisation : le compte à rebours du temps de stérilisation commence depuis l'atteinte de la température de stérilisation souhaitée jusqu'à l'expiration de la période d'exposition.
4. Refroidissement à 40-50 0 C.
5. Retrait des produits.
Riz. 8
Méthode plasma n'est pas encore répandu en raison du manque de production de tels stérilisateurs et de leurs consommables par l'industrie nationale. Cependant, la méthode donne des résultats encourageants grâce à :
Stérilisation à faible exposition ;
Absence totale nocivité;
Qualité de stérilisation garantie, car est effectué dans un appareil spécial doté d'un système de contrôle automatique du programme, avec surveillance constante du respect des paramètres critiques de stérilisation et blocage des erreurs, documentation automatique du processus de stérilisation. Les stérilisateurs de la série « Sterrad » (société Johnson and Johnson, USA) répondent à toutes ces exigences ; cependant, leur adoption généralisée est entravée par des prix élevés, inabordables pour le secteur de la santé publique en général.
Stérilisation infrarouge– une nouvelle méthode de stérilisation - thermodynamique pulsée basée sur le rayonnement infrarouge d'une source - une lampe électroluminescente avec de puissantes impulsions à court terme. Avec l'échange thermique radiant, le temps de stérilisation varie de 1 à 12 minutes et la phase de démarrage est inférieure à 15 secondes. La méthode radiante est idéale pour la stérilisation pulsée à haute température des instruments métalliques, garantit une préservation maximale des propriétés de l'outil de coupe et est facile à utiliser et à entretenir. La stérilisation des instruments s'effectue à ciel ouvert, en mode automatique. Si les paramètres spécifiés ne sont pas respectés, une alarme lumineuse et sonore est déclenchée. Compte tenu de la stérilisation des produits sans emballage, le stérilisateur peut être proche du lieu d'utilisation des instruments, ce qui le rend indispensable en l'absence de stocks d'instruments circulants, dans la nécessité d'une stérilisation rapide dans des conditions d'utilisation répétée, dans l'absence de conditions particulières pour le stockage à long terme et l'impossibilité de remettre les instruments à un centre de service central.
Méthode Glasperlène– la stérilisation des dispositifs médicaux est effectuée dans des stérilisateurs en glasperlène à une température de 190-240 0 C. Seuls les petits produits entièrement métalliques non emballés et entièrement placés dans l'environnement de billes de verre chauffées peuvent y être complètement stérilisés. De plus, les fabricants de stérilisateurs étrangers en glasperlène indiquent un temps de maintien déraisonnablement court - 5 à 15 secondes. Les instruments plus grands ne peuvent pas être stérilisés même en 3 minutes. Il n'existe aucun moyen chimique ou bactériologique pour contrôler le fonctionnement de ces stérilisateurs.
Méthode chimique (solutions de substances chimiques). DANS dernières années La gamme de produits chimiques sous forme de solutions a été considérablement élargie. Pour une stérilisation effectuée dans un délai relativement court (60-75"), des agents contenant de l'oxygène et du chlore sont recommandés dans la Fédération de Russie, dans la plupart des cas efficaces dans température ambiante, ou des produits contenant des aldéhydes, dont le temps de maintien est réduit en augmentant la température à 40-50 0 C.
Des technologies telles que la stérilisation utilisant des solutions activées électrochimiques (anolytes) sont intéressantes. Les avantages de la méthode sont la possibilité d'obtenir une solution directement dans du MO à partir d'eau potable et de sel de table. L'inconvénient de ces produits est leur effet néfaste sur les produits en métaux résistants à la corrosion.
La solution contenant de l'oxygène la plus couramment utilisée est une solution à 6 % de peroxyde d'hydrogène, qui possède une propriété détoxifiante prononcée. Pour la stérilisation, on utilise la méthode d'immersion complète dans une solution de produits à base de polymères, de caoutchouc, de verre et de métaux résistants à la corrosion ; exposition - 360" à 18 0 C. À la fin de la période d'exposition, les produits sont lavés deux fois avec de l'eau distillée stérile et transférés dans des récipients stériles, par exemple des boîtes de stérilisation, recouverts d'une feuille stérile (serviette) et bien fermés. (période de stérilité - 3 jours) ou disposé sur une table à instruments stérile pour une utilisation dans les 6 heures.
Avantages: disponibilité universelle et facilité d’exécution.
Défauts: stérilisation sans emballage, nécessité de lavage et, par conséquent, possibilité de recontamination.
Pour stériliser les produits médicaux à l'aide d'une méthode chimique, vous pouvez utiliser des solutions d'autres produits chimiques dont l'utilisation est approuvée par le ministère de la Santé de la Fédération de Russie.
Méthode chimique (gaz). La stérilisation des dispositifs médicaux par la méthode au gaz utilisant de l'oxyde d'éthylène et du formaldéhyde est extrêmement peu utilisée en Fédération de Russie, car les appareils dotés du principe de fonctionnement spécifié ne sont pas produits en Russie et les stérilisateurs à gaz étrangers sont coûteux. De plus, le temps de stérilisation est de plusieurs heures, après quoi il est nécessaire d'éliminer des produits tous les résidus du produit appliqué. Dans le même temps, le dégazage nécessite dans certains cas la présence d'aérateurs spéciaux et prend un temps considérable.
Sont utilisés physique Et méthodes de stérilisation chimique .
À méthodes physiques stérilisation comprennent la stérilisation à la vapeur sous pression (autoclavage), la stérilisation à l'air chaud (four sec) et la stérilisation par rayonnement.
À méthodes de stérilisation chimique inclure la stérilisation au gaz et la stérilisation avec des solutions chimiques.
Stérilisation à la vapeur sous pression
(par autoclavage) instruments chirurgicaux, pansements, linge et vêtements chirurgicaux, caoutchouc médical
des produits. Tout est stérilisé dans des conteneurs de stérilisation. Dans ce cas, leurs trous latéraux sont ouverts avant la stérilisation et le couvercle est bien fermé. Existe.
Pour contrôle de stérilité
3 indicateurs de stérilité scellés ou de l'acide benzoïque avec de la fuchsine en flacon sont placés dans le bix. Après chargement des bacs, l'autoclave est fermé par un couvercle hermétique. La stérilisation à la vapeur sous pression est une procédure complexe et il existe un risque d'explosion de l'appareil. Par conséquent, une personne spécialement formée doit travailler dans la salle de stérilisation.
personnel.
Existe trois modes principaux de stérilisation
:
1. À une pression de 1 atm., température 120 °C - 1 heure.
2. À une pression de 1,5 atm., température jusqu'à 127°C - 45 minutes.
3. À une pression de 2 atm., température jusqu'à 134 °C - 30 minutes.
Une fois la stérilisation terminée, les bix sont conservés dans un autoclave chaud avec la porte entrouverte pendant un certain temps. Lors du retrait des bix de l'autoclave, les trous latéraux des bix sont fermés.
et marquez la date de stérilisation sur un morceau de toile cirée fixé au bix. Une poubelle fermée sans filtres maintient la stérilité des objets qu'elle contient pendant 72 heures (3 jours), et une poubelle avec filtres - pendant 20 jours. Une boîte de stérilisation ouverte reste stérile jusqu'à 6 heures.
Stérilisation à l'air chaud réalisée dans des fours spéciaux à chaleur sèche. Stérilisez les instruments métalliques, les seringues réutilisables et la verrerie. Tout cela est placé sur treillis métallique placard La stérilisation est effectuée porte de l'armoire fermée pendant 1 heure à une température de 180 °C. A titre de contrôle, du saccharose, de la thiourée ou un indicateur industriel scellé sont placés sur une grille dans des bouteilles dans une étuve à chaleur sèche. Les fours à chaleur sèche sont généralement situés dans les salles de stérilisation des départements.
À stérilisation par rayonnement Le traitement antimicrobien est réalisé à l'aide de rayonnements ionisants (rayons Y), de rayons ultraviolets et d'ultrasons. Lorsque vous travaillez avec des rayonnements ionisants, des précautions de sécurité particulièrement strictes sont nécessaires. Par conséquent, la stérilisation par rayonnement est une méthode de stérilisation en usine. Le matériel médical stérile, les instruments, les gants, les seringues, etc. sont produits dans des emballages scellés et stockés jusqu'à 5 ans.
Stérilisation au gaz réalisée dans des chambres hermétiques spéciales. La stérilisation s'effectue à la vapeur de formol (un comprimé de formaldéhyde est placé au fond de la chambre) ou à l'oxyde d'éthylène. Les parties optiques des dispositifs, le matériel de suture, les objets en plastique et en caoutchouc sont soumis à une telle stérilisation. Selon les composants du mélange gazeux et la température dans la chambre, la stérilisation dure de 6 à 48 heures. La méthode peut être utilisée en milieu hospitalier.
Stérilisation avec des solutions chimiques - Ce méthode à froid stérilisation. Les objets médicaux en caoutchouc, les parties endoscopiques des appareils et les instruments métalliques peuvent être stérilisés. Pour ce faire, utiliser : une solution de peroxyde d'hydrogène à 6%, 3 heures à une température de 50°C et 6 heures à une température de 18-20°C, une solution de dézoxon à 1% pendant 45 minutes. à une température de 18°C ; Solution de pervomur à 8 % ou solution de chlorhexidine à 2 %, 5 minutes à 20 °C ; Alcool éthylique à 70°. Verre, plastique ou batterie de cuisine en émail avec un couvercle hermétique. Toutes les solutions sont utilisées une fois. Après stérilisation, tous les articles sont lavés deux fois avec une solution isotonique stérile à l'aide d'une pince stérile et stockés sur une table stérile. Le contrôle de cette méthode est bactériologique.
Sauvegarder vies humaines- Il s'agit d'une tâche très responsable confiée au personnel médical. Et pour y faire face efficacement, il est important d’utiliser des instruments médicaux stérilisés et propres. Dans l'article, nous examinerons en détail la méthode de stérilisation de l'air et ses caractéristiques, positives et côtés négatifs.
Qu'est-ce que la stérilisation du matériel médical ?
La stérilisation consiste à nettoyer le matériel médical, en éliminant les microbes, leurs spores et les virus de sa surface par une action chimique et physique. Un dispositif médical est stérile lorsque sa charge biologique probable est inférieure ou égale à 10 puissance -6. Tout, y compris la méthode de stérilisation à l'air, est utilisé pour les produits en métal et en verre (nous y reviendrons plus en détail ci-dessous), qui entrent en contact avec le sang humain, avec la surface des plaies, touchent les muqueuses et peuvent perturber leur intégrité.
Principales étapes de la stérilisation
L'ensemble du processus de stérilisation comprend trois étapes :
- Désinfection des fournitures médicales.
- Effectuer un nettoyage approfondi avant la stérilisation.
- Stérilisation directe.
Il est important de rappeler que la stérilisation des produits médicaux (méthode aérienne) ne sera efficace que si les trois étapes sont réalisées de manière cohérente. Sinon, des micro-organismes peuvent rester sur les instruments, ce qui, au contact des plaies ou des muqueuses, entraînera une infection. Les méthodes de stérilisation à la vapeur et à l'air sont très similaires, mais elles présentent des différences significatives dans les modes de fonctionnement. Regardons de plus près.
Principales exigences pour la stérilisation des instruments médicaux
La stérilisation est un processus complexe, donc pour la réaliser efficacement, certaines conditions doivent être remplies :
- Nettoyage efficace.
- Matériaux d'emballage requis.
- L'emballage des instruments médicaux doit être conforme à toutes les règles.
- Le stérilisateur doit être chargé de produits médicaux utilisant une certaine technologie.
- Les instruments médicaux soumis à la stérilisation doivent être d'excellente qualité et en quantités strictement respectées.
- Après stérilisation, le matériel doit être stocké correctement, manipulé habilement et les règles de transport doivent être respectées.
L'ensemble du processus de stérilisation des instruments s'effectue depuis la fin de l'opération jusqu'au moment où l'instrument est rangé pour le stockage (ou jusqu'à la prochaine utilisation). Une désinfection correctement effectuée garantira la stérilité et prolongera la durée de vie possible des instruments.
Tout, y compris la méthode de stérilisation de l'air, est réalisé selon l'algorithme suivant :
- Effectuer un nettoyage mécanique de l'outil utilisé.
- Vérifiez les dommages à la surface.
- Lavez ensuite les produits.
- Ensuite, les instruments sont séchés.
- Ensuite, ils doivent être placés dans un emballage de stérilisation.
- Une stérilisation directe est effectuée.
- Ensuite, les produits sont stockés dans un endroit stérile ou utilisés dès que nécessaire. S'ils sont correctement emballés, les instruments médicaux peuvent être conservés d'un jour à six mois.
Méthode de stérilisation de l'air
La méthode de stérilisation de l'air est utilisée pour traiter les dispositifs médicaux, les pièces d'appareils constituées de métaux résistants à la corrosion, produits en verre marqué 200°C, ainsi que des produits médicaux en caoutchouc.
Avant la stérilisation, il est nécessaire d'effectuer un nettoyage préalable à la stérilisation et de sécher soigneusement les instruments à une température de 85°C. Pour le séchage, utilisez une armoire de séchage spéciale. L'ensemble du processus de stérilisation prend environ 2,5 heures (150 minutes).
Traitement de pré-stérilisation des dispositifs médicaux
La méthode de stérilisation à l'air ne peut être utilisée qu'après préparation minutieuse outils pour ce processus.
Ainsi, le traitement de pré-stérilisation est une mesure par laquelle les protéines, les graisses et les contaminants médicinaux sont éliminés de la surface des instruments médicaux. Ce processus contribue à rendre la stérilisation plus efficace et à réduire le risque de réactions pyrogènes.
Pour préparer correctement les instruments à la stérilisation :
- Préparez une solution de lavage-désinfection et trempez-y le matériel médical usagé.
- À l’aide de cotons-tiges ou de brosses, lavez soigneusement les instruments dans la même solution. Attention particulière il faut faire attention aux joints (serrures, ouvertures de canaux), car c'est en eux que s'accumulent les micro-organismes nuisibles. Après utilisation, les pinceaux doivent être lavés et laissés dans un endroit sec, et les cotons-tiges doivent être jetés.
- Un instrument propre est rincé à l'eau courante pour éliminer les traces et les odeurs de la solution de nettoyage.
- Après cela, chaque instrument médical est rincé séparément dans de l'eau distillée pendant 30 secondes.
- Après rinçage, le produit est soigneusement séché. Il peut être laissé sécher à l'air libre ou vous pouvez utiliser un four à chaleur sèche à une température de 85 degrés.
- Une fois toutes les étapes terminées, le contrôle qualité du traitement de pré-stérilisation est effectué par prélèvement d'échantillons.
Une fois le traitement terminé, vous pouvez procéder directement à la stérilisation des instruments à l’air chaud et sec.
Modes de méthode aérienne
La méthode de stérilisation de l'air comporte différents modes. Chacun d'eux diffère par la température et le temps de stérilisation. C'est la variété des modes de fonctionnement qui rend la méthode de stérilisation de l'air (air chaud sec) si populaire. Le tableau est ci-dessous.
| Température | Temps | Contrôle de processus | ||
| Signification | Tolérance | Signification | Tolérance | |
| 160 | +/- 3 | 150 | +/- 5 | Lévomycétine |
| 180 | +/- 3 | 60 | +/- 5 | Acide tartrique, thiourée |
| 200 | +/- 3 | 30 | +/- 3 | Thermomètre à mercure |
Le principal mode de stérilisation par voie aérienne est une température de 180°C et une heure de temps. Ce mode est le plus fiable et le plus optimal.
Conditions de stérilisation de l'air
Pour que les instruments médicaux soient correctement désinfectés à l’air chaud sec, certaines conditions doivent être remplies :
- Seuls les produits complètement séchés peuvent être stérilisés.
- Vous pouvez stériliser des produits emballés dans des sacs en papier non imprégnés, dans du papier résistant à l'humidité ou sans emballage du tout. En fonction du choix du conditionnement (ou de son absence), la durée de conservation des instruments stérilisés sera déterminée.
- La stérilisation du coton est interdite.
Durée de conservation maximale des instruments stériles
Si les instruments ont été stérilisés dans un emballage (en papier), alors leur stérilité restera pendant trois jours. Quant aux produits traités à l’air chaud sec sans emballage, ils doivent être utilisés immédiatement après la fin du processus de stérilisation.
Procédure de fonctionnement d'un stérilisateur utilisant la méthode aérienne
Un stérilisateur d'air est utilisé pour effectuer la stérilisation à l'air chaud et sec. Plusieurs règles doivent être respectées pour éviter un traitement des instruments de mauvaise qualité.
Premièrement, vous ne pouvez pas charger tous les articles en vrac dans le stérilisateur ; ils doivent tous être soigneusement disposés.
Deuxièmement, les gros outils qui prennent beaucoup de place doivent être placés sur l'étagère supérieure. De cette façon, le flux d’air chaud sera réparti uniformément.
Troisièmement, les produits complexes, comme les ciseaux ou les pinces, doivent être placés ouverts dans le stérilisateur pour assurer un meilleur traitement de l'air. Les seringues doivent être placées démontées et la verrerie médicale ne doit pas être empilée les unes dans les autres. Autrement dit, vous ne pouvez pas placer un verre dans un verre. Chaque instrument doit être disposé séparément.
Algorithme pour travailler avec un stérilisateur d'air
- Le stérilisateur n'a pas besoin d'être préchauffé, tous les instruments sont repliés à l'intérieur de l'équipement froid.
- Après cela, il est allumé et chauffe.
- Lorsque le stérilisateur atteint la température souhaitée (180 degrés), le temps de stérilisation commence à compter (une heure).
- Une fois le temps écoulé, éteignez l'équipement et attendez qu'il refroidisse à 40-50 degrés.
- Ensuite, les instruments médicaux traités sont retirés.
Avantages de la méthode de stérilisation de l'air
La méthode de stérilisation à l’air présente un avantage indéniable par rapport à la méthode à la vapeur : le faible coût du matériel nécessaire.
De plus, il existe d'autres qualités positives :
- Cette méthode a de faibles propriétés corrosives.
- Pénètre profondément dans le matériau et garantit un traitement de haute qualité.
- Ne nécessite pas d'aération.
- Ne nuit pas à l'environnement.
Inconvénients de la stérilisation à air chaud et sec
Malgré un certain nombre d'avantages, la méthode de stérilisation de l'air présente également des inconvénients.
Inconvénients de cette méthode :
- Haute intensité énergétique de la méthode.
- Le cycle est trop long. La stérilisation nécessite au moins une demi-heure et un temps supplémentaire (environ une heure) pour chauffer et refroidir l'équipement.
- Il est impossible de stériliser des produits en tissu et en plastique de cette manière.
- De nombreux outils métalliques ne supportent pas très bien ce type de traitement. haute température: ils perdent leurs propriétés et deviennent vite ternes.
Conclusion
Dans l'article, nous avons étudié en détail la méthode la plus connue et la plus utilisée de stérilisation des instruments médicaux - le traitement à l'air chaud sec ( voies aériennes), ses caractéristiques, ses côtés positifs et négatifs. C’est la méthode utilisée par la plupart des hôpitaux modernes.
En conclusion, je voudrais dire que peu importe la méthode de stérilisation choisie, l'essentiel est que le nettoyage et la désinfection des produits soient effectués de manière efficace et dans le respect de toutes les règles.